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1细胞培养上清
细胞培养液在2500离心20分钟后，收集上清即刻检测，或者分装，-20℃贮存。避免反复冻融。
2．血清样本
分离管分离血清。在1000离心之前，使血样凝集0分钟。吸取血清样本之后即刻检测，或者分装，-20℃贮存。避免反复冻融。
血浆样本
EDTA、枸橼酸钠或肝素抗凝收集血浆样本。在血样收集分钟内离心收集样本。即刻检测，或者分装，-20℃贮存。避免反复冻融。
注：不要使用严重溶血或高血脂的样本。所有样本收集后，应及时分装并贮存于-20℃。如果在24小时内检测，样本可以存放在2-8℃。避免样本的反复冻融。在分析前，冷冻样本应该缓慢的恢复至室温，轻柔地混匀。检测前，样本中可见的沉淀必须去除。
包裹二已设阴性对照，还需空白对照吗
首先要清楚空白对照和阴性的区别。空白对照：仅用稀释液代替检测样本，用以观察最终反应的显色本底，并用于酶标仪消除、扣除本底，即以本底为零，读取阳性、阴性对照孔和样本孔的吸光值。阴性对照：是本验检测与待检物有同源性和同质性，又不含有待检物质，并能客观比较和鉴别处理因素之间的差异。
包裹出现白板，什么原因呢
如果显色完成后，肉眼可见整板没有显示反应，可能原因及应对方法详见下表。
序号
可能原因
解决方案
1
试剂盒储存不当；不同试剂盒试剂混用
购买新的试剂盒，注意储存条件；不可混用
2
孵育温度低，时间短
如果温度偏低，则延长孵育时间和显色时间
错加、漏加试剂
严格按照说明书步骤添加正确试剂
4
用于配置溶液的容器不干净，或水有问题
使用干净容器以及合格的蒸馏水
5
检测抗体和或HRP浓度太低
参照说明书，不可随意稀释
6
试剂温度不均一
所有试剂要室温平衡0
7
洗板过程中浸泡时间长，洗板次数太多，洗板冲击力大
严格按说明书操作
包裹四出现花板，什么原因呢
花板是指空白、阴性、阳性对照以及室内质控孔结果正常，而标本孔的吸光度（OD值）却明显偏高，可能原因及应对方法详见下表。
序号
可能原因
解决方案
1
洗涤次数少，不充分
按说明书要求洗涤
2
底物,	,5,5	-四甲基联苯胺（TMB）被金属离子
或氧化剂污染或曝光
配置时使用干净容器以及合格蒸馏水；避光保存
孵育温度高和或时间过长
控制孵育和最后酶促反应的温度和时间
4
加样时未更换头，造成交叉污染
每个样都更换头
5
附近孔交叉污染
洗涤时，洗液不可溢出孔洞，垂直拍板；
使用合适的拍板纸，避免孔内进入纸屑尘渣；
孵育时封板要严密，防止阳性标本的液体蒸发
6
样本存在内源性干扰物质
推测可能的感染物质，并进行对应处理
7
样本溶血、贮存过久、凝集不全、被细菌污染、
采血管中添加物影响等
避免溶血、污染、过久储存等现象
包裹五标曲不佳，什么原因呢
ELISA验中标准品进行了倍比稀释，但标准曲线最高点OD值偏高或偏低，且没有梯度，可能原因及应对方法详见下表。当然，也会存在酶标板封闭不足、本底不稳定的情况。
结果
可能原因
解决方案
标曲最高OD太高
（0）
TMB孵育时间太长
调整孵育时间
指纹、杂质影响
双波长检测，去背景
标曲最高OD正常
标准品进行下一步稀释前没有混匀
先混匀，再移液
不同试剂盒或批号的试剂混用
不能混用
检测抗体浓度过高
按照说明书调整到最佳浓度
孵育时未加盖导致挥发和污染
贴封片或加盖
孔间污染
加样及洗板时防止孔间污染
标曲最高点OD低
（08）
显色时间不够
S1、S2深蓝色，梯度明显，S5有淡蓝色时可终止
粉末标准品未充分溶解
粉末标准品按说明书加一定体积的液体后，轻柔混匀，
室温静置0，充分溶解
标准品反复冻融
标准品反复冻融后活性降低；购置新的标准品
孵育温度、时间
所有试剂室温（~25℃）平衡0，
孵育时间按照说明书指示
洗涤浸泡时间过长
按照说明书操作，勿人为增加浸泡时间
酶标板在贮存或洗后拍干时过分干燥
防止板过于干燥
不同试剂盒或批号的试剂混用
不能混用
显色液变质
更换新的显色液
包裹六标曲正常，样本吸光值极低，什么原因
ELISA验中标准品进行了倍比稀释，但标准曲线最高点OD值偏高或偏低，且没有梯度，可能原因及应对方法详见下表。当然，也会存在酶标板封闭不足、本底不稳定的情况。
此外，如果肉眼观察酶标板显色正常，而上机所测OD异常，可检测酶标仪参数的设定以及滤光片是否匹配。洗涤液多为非离子型中性缓冲液，既含有亲水集团，也含有疏水基团，可以使吸附在酶标板上的蛋白解离而溶于水中，去除非特异性吸附物质，但是浓度太高时，会引起包被抗体脱落。所以需要正确稀释。同时应该用高质量的纯净水稀释，不能引入别的离子，以免对抗原抗体结合和酶促反应产生影响。
序号
可能原因
解决方案
1
样品不适合做ELISA检测
样品一般选择培养上清、血清、血浆。
其他样品形式可能不适合做ELISA检测或者需要优化检测的条件
（例如稀释液的成分）
2
样本含量低于灵敏度
浓缩样本或使用高敏试剂盒，避免反复冻融
样本存于吸附性强的试管中
选择蛋白吸附能力低的硅化EP管
4
冻融后，蛋白凝集，分布不均
样本避免反复冻融
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