将尼龙膜漂浮在去离子水表面直至滤膜

ningxueqin · 发表于 2021-8-24 19:11:47

　　破性转移缓冲液(0.01mo/L NaOH, 3mol/L NaCI)适于将RNA转移至带正电荷的尼龙膜，而20X ssC中性缓冲液适于将RNA转移至不带电荷的尼龙膜。

　　5.用新的解剖刀或切纸刀裁一张长宽均大于胶1mm的尼龙膜。按触膜时应戴上手套或用平头镊子(如Mllipore镊子)，因为油腻的手接触过的尼龙膜不易没湿。

　　6.将尼龙膜漂浮在去离子水表面直至滤膜从下往上全部湿透，然后将膜浸入10XSSC中至少5min，用干净的解剖刀片切去滤膜一角，使其与凝胶的切角相对应。

　　不同批号的尼龙膜其浸湿速率不同，若膜在水面上漂浮几分钟仍未湿透，直接换一张新的膜，因为未完全浸湿的膜用于RNA转移是不可靠的。转移系统的安装和RNA的转移(参见图6-6)

　　7.小心将胶倒转后置于平台上滤纸的中央。确保厚滤纸和胶之间没有气泡滞留。

　　8.用塑料保鲜膜或封口膜围绕凝胶周边，但不是覆盖凝胶。以此形成的屏障可阻止液体自缓冲液槽直接流至凝胶上方的纸巾层，若纸巾堆放不整齐，就容易从凝胶的边缘垂下并与支持平台接触，造成的短路是导致RNA由凝胶向膜转移效率下降的主要原因。

　　9.用转移缓冲液浸湿胶(见步骤4)，在凝胶上方放置湿润的尼龙膜，并使两者的切角相重叠，滤膜的一-条边缘应刚好超过凝胶上部加样孔线的边缘。

　　且膜置于凝胶表面合适位置后，就不要轻易移动膜，并确保膜与胶之间没有气泡。

　　10.用相应的转移缓冲液浸湿两张滤纸(与胶大小-致的)，放于湿的尼龙膜上，用玻棒赶走所有的气泡。